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上路行驶机动车不按规定年检一次扣三分。

根据《道路交通安全法实施条例》第十六条的规定，机动车应当从注册登记之日起，按照规定期限进行安全技术检验。

根据《道路交通安全违法行为记分分值》第三条第十二项的规定，上道路行驶的机动车未按规定定期进行安全技术检验的，一次记3分。

根据《道路交通安全法实施条例》第十七条规定，已注册登记的机动车进行安全技术检验时，机动车行驶证记载的登记内容与该机动车的有关情况不符，或者未按照规定提供机动车第三者责任强制保险凭证的，不予通过检验。